近日，团队成员在《International Journal of Biological Macromolecules》（影响因子6.953）上发表标题为“Development of a monoclonal antibody against PRRSV glycoprotein 3 using an immuodominant peptide as immunogen”的研究论文。郑州大学为本文的第一作者单位，本研究得到国家重点研发计划课题（2016YFD0500704)）及国家自然科学基金的资助。

       糖蛋白3（GP3）是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的保护性抗原和次要结构蛋白，在病毒组装和感染中发挥着至关重要的作用。特异性识别PRRSV GP3的单克隆抗体在PRRSV的基础研究和诊断方面都是十分重要的工具。具有高纯度和天然构象的抗原是产生特异性单克隆抗体的必要条件。但是GP3作为一种高度糖基化的膜蛋白，原核系统表达的重组GP3蛋白因无法正确折叠，具有较低的免疫原性和反应原性。免疫优势表位通常位于病毒的表面，易被B细胞表面受体或抗体识别，因此针对免疫优势表位的单克隆抗体更适合用于病毒的检测。在本研究中，我们合成了23条覆盖GP3蛋白氨基酸序列的重叠多肽，并利用PRRSV阳性猪血清鉴定出5个免疫显性肽段，将其中1条多肽与BSA偶联（BSA-P4）作为免疫原免疫BALB/c小鼠，获得1株抗GP3的单抗1E5。同时结果发现mAb 1E5可以与HP-PRRSV毒株特异性反应，而与C-PRRSV或NADC30-like PRRSV毒株无反应。利用丙氨酸定点替换的方法，发现蛋白第E65、L67和P69位氨基酸残基是mAb 1E5识别的关键位点，影响单抗与蛋白的结合。综上，本研究提供了一种以免疫显性肽段为靶标制备特异性单克隆抗体的新策略，所制备的单克隆抗体1E5有助于HP-PRRSV与C-PRRSV及NADC30-like PRRSV快速鉴别诊断方法的建立。