近期,团队成员在《Applied Microbiology and Biotechnology》期刊(影响因子4.813)发表题为:Screening and identification of B cell epitope of the nucleocapsid protein in SARS-CoV-2 using the monoclonal antibodies的研究论文。郑州大学为本文的第一作者单位。研究得到了国家自然科学基金,智汇郑州1125项目的资助。
由SARS-CoV-2引起的持续的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)大流行对全球来说是一场巨大的公共卫生危机。经证实核衣壳(N)蛋白与病毒发病机制、宿主免疫应答调节、RNA转录、复制和病毒包装密切相关。因此,核衣壳蛋白是新型冠状病毒检测的优势抗原靶点。研究团队根据昆虫细胞密码子偏爱特性优化了N蛋白基因的核苷酸序列,并将该基因构建成含有C端6×His组氨酸标签的融合N蛋白并插入pFastBacTM1表达载体中,在昆虫细胞sf21中表达。利用重组融合N蛋白制备了6株单抗(4G3、5B3、12B6、18C7-A2、21H10-A3、21H10-E9)。经过Western Blot、IFA及ELISA实验验证表明这些单克隆抗体具有高抗体亲和力、高滴度及与N蛋白有强烈的反应能力。随后,合成14个覆盖完整N蛋白的重叠肽段(N1-N14)。经过肽- ELISA和Dot- blot实验鉴定,N14为主要的线性B细胞表位区域,根据相同思路逐渐截短该区域,最终将B细胞表位定位到肽401-DFSKQLQQ-408。同时,将多个国家的SARS-CoV-2毒株N蛋白序列进行同源性分析,表位401-DFSKQLQQ-408具有极高的保守性。本研究的发现为COVID-19疫苗的设计和病毒检测提供了新的指导。
